Cell culture | 活化復甦冷凍細胞 2020/12/03

Cell culture | 活化復甦冷凍細胞

收到細胞株包裹時， 請檢查細胞株凍管是否有解凍情形， 若有請立即通知原廠。細胞株請盡速開始培養， 或立即冷凍保存(置於-70 °C或液氮桶冷凍保存)。

細胞復甦的原則－快速融化

必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。細胞活化後，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常。

細胞復甦前準備

1. 將培養基於恆溫水浴中預熱至37℃

2. 將無菌操作台檯面用75％酒精擦拭、紫外線照射 30 min。

3. 在無菌操作台中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
 

細胞復甦具體步驟

1. 材料：
   1. 恆溫水槽
   2. 新鮮培養基
   3. 無菌吸管 / 離心管 / 培養瓶
   4. 液氮或乾冰容器
       
2. 步驟：
   1. 將新鮮培養基置於 37°C 水槽中回溫(或其他適當之培養溫度)，回溫後以 70% ethanol擦拭之，移入無菌操作台內。
       
   2. 操作人員應戴防護面罩及手套，自液氮或乾冰容器中取出冷凍管，防止冷凍管可能爆裂之傷害。
       
   3. 取出冷凍管，立即放入 37°C 水槽(或其他適當之培養溫度)中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1~3 分鐘內全部融化，以70% ethanol 擦拭保存管外部，移入 無菌操作台內。
       
   4. 依據細胞種類和濃度，於無菌操作台內取適量培養基加至適當之培養瓶中，緩慢加入已解凍之細胞懸浮液(一般稀釋比例為 1:10～1:15)， 與培養基混合均勻後，放入培養箱培養。可另取樣少許解凍細胞懸浮液作存活測試。
       
   5. 解凍後是否立即去除冷凍保護劑 (例如 DMSO 或 glycerol)，依細胞種類而異。對大多數細胞株而言，不需要立即去除冷凍保護劑。若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5~10ml 培養基之離心管內，離心 1,000 rpm、5 分鐘後，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入培養瓶內，置於 適當之培養箱培養。
       
   6. 若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養隔日後更換培養基即可。

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