細胞馴化 Cell Adaptation

細胞培養大多數都依賴血清培養，血清中含有豐富的營養物質，例如:蛋白質、生長因子、生長激素、胺基酸、維生素、糖、脂質以及微量元素維持細胞生理。體外研究以及生產應用，最常用的是胎牛血清(FBS)，優點在於高水平的營養以及含有低水平的抗體，缺點在於FBS供應不穩定，且不同的批次造成細胞培養不穩定的影響，加上成本高及道德疑慮，故使用合適高質量替代產品-Specsure® Bovine Growth Serum並配合Specsure® Medium Supplement  細胞培養添加劑，達到與FBS相仿的細胞培養效果以及生物機制。許多細胞株可直接由FBS換成Specsure® Bovine Growth Serum，不需適應期間，如U2OS, HEK293, CHO, Vero, NB, HeLa, A549 和 MDBK等等。然而，從未嘗試更換血清來源的細胞株，多數研究者不敢貿然更換血清。

ACE BioLabs 不僅是提供您 Specsure® Bovine Growth Serum，也提供您 FBS 更換血清到 Specsure® Bovine Growth Serum 細胞馴化客製化服務，我們將藉由直接法及間接法兩種方式，將您的細胞培養環境由 FBS 更換到  Specsure® Bovine Growth Serum。

ACE BioLabs 已成功完成馴化的細胞株：MCF7、A549、HEK293T、RAW264.7、M210B4 等。

馴化步驟

直接法 : 直接更換 FBS 血清至 Specsure® Bovine Growth Serum，搭配 Specsure®Medium Supplement 幫助細胞生長適應。

1. 細胞繼代過程中，將細胞分成兩組，細胞培養於10% FBS培養液為對照組，另一組直接將細胞培養液更換成添加10 % Specsure® Bovine Growth Serum + 0.1% Specsure® Medium Supplement為馴化組。
2. 依照細胞生長速度，繼代 1-2 次後，細胞培養液更換成添加10 % Specsure® Bovine Growth Serum
3. 觀察其生長速率以及型態變化。以CCK-8
4. 馴化完成後，取上清液檢測黴漿菌，並凍存細胞。

間接法: 逐步降低 FBS 血清用量並逐漸增加 Specsure® Bovine Growth Serum的用量

1. 細胞繼代過程中，將細胞分成兩組，細胞培養於10% FBS培養液為對照組，另一組直接將細胞培養液更換成添加 5% FBS + 5 % Specsure® Bovine Growth Serum 為間接馴化組。。
2. 依照細胞生長速度，繼代細胞2~3代，觀察其數量以及型態變化，待細胞適應其之培養液。
3. 觀察生長速率及型態變化趨於穩定，更換5% FBS + 5 % Specsure® Bovine Growth Serum 至10 % Specsure® Bovine Growth Serum 的培養液。
4. 持續繼代細胞2~3代，讓細胞適應對應之培養液。
5. 觀察生長速率及型態變化，趨於穩定時視為馴化完成。
6. 馴化完成後，取上清液檢測黴漿菌，並凍存細胞。

注意事項:

• 馴化細胞過程中，直接法馴化細胞的組別，使用 Specsure®Medium Supplement 作為添加劑，幫助細胞生長適應。
• 間接馴化細胞過程中，若發現細胞生長緩慢，將視情況添加Specsure® Medium Supplement 幫助細胞生長適應。
• 若在馴化細胞過程中，發現細胞型態改變且無法回復，則判斷該細胞株無法使用Specsure® Bovine Growth Serum。

馴化案例 1

A549細胞株

上圖為A549細胞經由Specsure® BGS間接法馴化成功之細胞，繼代使細胞更適應穩定過後，與FBS種相同的細胞數目，如圖所示細胞型態一致，經由CCK8 cell viability test三天細胞數目變化確認細胞生長速率，比較FBS以及Specsure® BGS兩者，生長速率及存活率皆相似，因此，A549細胞株可以使用Specsure® BGS配合Specsure® Medium Supplement替代FBS培養。

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