Western Blotting │ 蛋白質定量方法比較 BCA vs Bradford

BCA相較Bradford進行蛋白質定量，其靈敏度具有很大的差異性，以下就以ACE Biolabs的實驗結果進行說明：

Bradford Assay原理

Bradford的測定法是利用Coomassie blue結合蛋白質的能力，使試劑由紅棕色轉變為藍色，利用ELISA Rader測定595 nm的吸光度，帶入standard curve就可以知道樣品濃度。

BCA Assay原理

BCA測定法是以傳統的Lowry assay為基礎而發展的，利用銅離子與蛋白質在鹼性條件下反應，會由綠色變為紫色，用ELISA Rader測定562 nm的吸光度，帶入standard curve就可以知道樣品濃度。

BCA Assay/Braford Assay比一比

	BCA Assay (A1035)	Bradford Assay (A1034)
洗滌劑/buffer	不會干擾	會被部分種類干擾
適用蛋白質濃度檢測區間	5-2000 μg/mL	1-125 μg/mL
時間	30 min	1-5 min
吸光值	562 nm	595 nm
反應所需的sample量/well	25 μL	20 μL
Buffer限制	兼容大部分buffer	避免非離子型去污劑 (Ex: Triton、NP-40等)，對精氨酸和賴氨酸等鹼性和芳香族氨基酸高度敏感；對酸性buffer相容性差
試劑保存	室溫，24個月	4˚C，12個月