Cell culture | 細胞存活率試驗
細胞存活率試劑CCK8與MTT的比較
MTT分析法
MTT分析法利用比色法測量細胞代謝活性，此方法為細胞活力、增殖和細胞毒性的指標，MTT與活細胞粒線體中的琥珀酸脫氫酶作用，產生氧化還原反應Formazan藍紫色結晶，藉由二甲基亞風DMSO有機溶劑將紫色結晶溶解，產生紫色液體，藉由測定吸光值(570nm)評估細胞活性及增殖。
MTT assay實驗原理
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MTT assay 實驗流程
CCK-8 分析法
CCK-8材料含有tetrazolium salt-WST-8，WST-8被活細胞內的脫氫酶(dehydrogenase)被還原成可溶於培養基中的水溶性橘黃色產物WST-8 formazan，產物與活細胞數量成正比，使用CCK-8實驗步驟簡單，直接加入培養液中，放置一到四小時，即可測量，不需另外將上清液去除以及加入有機溶劑。WST-8 formazan的產量取決於細胞內脫氫酶的活性，可直接反映存活細胞的數量，使用比色法直接測量450nm波長。(下圖為反應式及操作步驟)
CCK-8實驗原理
CCK-8實驗流程
CCK-8與MTT靈敏度比較---實驗案例
以四種細胞株為例，於96孔盤接種同樣數量細胞株以及同樣生長條件下，使用兩者比較，結果顯示橘色線CCK-8吸光值比紫色MTT高，CCK-8於同樣情況下靈敏度較佳，較MTT更容易精確評估細胞存活率以及生長速率，區分組間差異。
MTT與CCK-8兩者比較
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MTT |
CCK-8 |
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MTT--> Formazan |
WST-8-->WST-8 Formazan |
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步驟繁瑣 |
時間短操作簡易 |
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細胞不可重複使用 |
細胞可繼續培養 |
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容易產生實驗誤差 |
實驗變因少 |
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批次易產生誤差 |
實驗再現性穩定 |
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需配置，效期短 |
可立即使用，4℃可存放一年 |
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明顯產生紫色結晶 |
顏色接近培養液，容易忘記添加 |
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毒性高 |
毒性低 |
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測定波長：550～600nm |
測定波長：450～490nm |
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需要更換培養液 |
不須更換培養液 |
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使用於貼附細胞 |
適用貼附及懸浮細胞 |
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不同細胞株數量需要優化 |
水溶性立即可測吸光值 |
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靈敏度較低 |
靈敏度高 |
細胞存活率試驗常見問題及解決方案
Ans: 貼附細胞於CCK-8需要每孔1000顆細胞以上，MTT需要因不同細胞株優化數量以及OD值範圍。
Ans: CCK-8可經由扣除背景值方式去除，MTT因去除培養基，加入透明DMSO有機溶劑溶解紫色結晶，可以直接測量OD值。
Ans: CCK-8對於細胞毒性低，使用過後，仍可以繼續培養，或是去除培養基使用MTT測試Cell viability佐證。
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