建構穩定細胞株 Stable Cell Line

流程

項目

內容

接案

1. 了解客戶需求
2. 簽訂服務委託書
3. 預付40%訂金與材料費

1. 了解細胞株特性評估建構穩定細胞株所需時程
2. 選擇轉染質體

材料準備

細胞培養條件確認

(3- 5 週)

1. 檢測細胞黴漿菌汙染
2. 檢測能否形成single colony (optional)
3. 檢測抗生素篩選條件
4. 特異細胞株轉染條件確認。無參考資料，需測試轉染條件。

建構表現載體

(3- 5 週)

1. 基因序列合成或sub-cloning。
2. 建構表現載體，DNA定序確認。
3. 大量純化表現載體。

慢病毒包裝

以293T細胞建構慢病毒

1. 以293T細胞建構慢病毒
2. 確認慢病毒效價達到MOI  5x10⁶/ml。

轉染表現載體到指定細胞株

感染指定細胞株
(依細胞株特性而定)

1. 慢病毒轉染指定細胞株 (MOI=5-10)
2. 依細胞株特性轉染1-2次

建立穩定細胞株

抗生素篩選目標基因穩定表達細胞群 (Stable pool)

(依細胞株生長速率而定)

1. 抗生素篩選 5-7 天
2. 收集穩定細胞群以及原始細胞株，以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。

篩選單一穩定細胞株**
(Optional)

上述細胞株經稀釋後篩選single clone
(依細胞株生長速率而定)

1. 稀釋穩定表達細胞群篩選single clone
2. 收集單一穩定細胞株(至少五株細胞)，以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。
3. 提供五株單一穩定細胞株之目標基因表達分析結果，由客戶選擇出貨細胞株。

出貨前檢測

將穩定細胞株培養至出貨規格：

1. 檢測黴漿菌
2. 檢測其目標基因表達。
3. 凍存細胞株

 (1-2週)

1. 檢測細胞黴漿菌
2. 收集出貨細胞株，以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。隨貨提供分析結果。
3. 細胞凍存 : 2x10⁶ cell/tube

細胞培養至出貨規格

Stable cell pool (2x10⁶ cell/tube) 凍管乙管

或

Stable cell line (2x10⁶ cell/tube) 凍管乙管
(增加凍管或細胞株數目，需額外收費)

 隨貨提供

1. 該穩定細胞株之目標基因表達分析結果。
2. 該穩定細胞株之黴漿菌檢測結果

客戶使用檢測

請於一個月內測試細胞，並告知測試結果

1. 專案建構之慢病毒留存6個月
2. 細胞凍管留存6個月