“ CRISPR 並非第一種基因編輯的方式,但是是迄今為止「最精確」基因編輯的技術 ”
CRISPR為近年來發展的新興熱門技術,全名為群聚且有規律間隔的短回文重複序列」(clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats, CRISPR),其來自於細菌為抵禦病毒所發展出的免疫抵禦機制。目前已有3套CRISPR系統(I-III)被發現,TypeI、III 而最廣泛被使用作為基因編輯的為CRISPR Type II System,此套系統包含 nuclease Cas9, crRNA 以及tracrRNA,透過tracrRNA輔助crRNA到目標互補DNA序列上,Cas9進行雙股DNA斷裂(Double strand break, DSB),進而達成基因敲除 (Knock-out) 編輯功能。科學家更進一步的將crRNA array以及tracrRNA結合成單一股 single-guide RNA (sgRNA),使的CRISPR/Cas9系統更容易進行操作。
Figure : 20-nt sgRNA (藍色) 與scaffold (紅色) 引導 Cas9 nucleaes (黃色)到 genomic DNA 互補序列上,Cas9 nuclease 在5' NGG 序列 (PAM 粉紅色) 前方3個base pair進行專一性的DSB。 ref: nature protocols | VOL.8 NO.11 | 2013
ACE Biolabs 具有台灣CRISPR 專業團隊,提供設計gRNA的專業意見,並有多種gRNA plasmid可供選擇。引進高效率電轉染技術平台,以達到最高效率、最高細胞存活率、最低off - target的機率。
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CRISPR 基因編輯 服務特點
1. 嶄新三條gRNA進行DSB技術,提升目標準確率
2. 使用sgRNA+Cas9+Reporter 三合一質體,不需像傳統嘗試不同比例。
3. 運用高效率電轉染技術,縮短時程,提高成功率。
4. 全方面,各類型細胞皆可操作。
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CRISPR 基因編輯 服務流程 CRISPR服務委託書
流程 |
項目 |
內容 |
接案 |
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材料準備 |
細胞培養條件確認
(約 3 至 5 週) |
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Sp-gRNA建構
(約 3 至 5 週) |
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轉染Cas9和Sp-gRNA表現載體到指定細胞株 |
轉染Cas9和Sp-gRNA表現載體到指定細胞株後,以抗生素篩選。 (約 2 至 3 週) |
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細胞株篩選 |
篩選標的基因兩個alleles均破壞的細胞株 |
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細胞株再篩選 |
上述細胞株再經一次篩選 |
收集細胞株之gDNA,以PCR方法判定兩個alleles均遭破壞。 |
DNA序列分析 |
PCR products經TA cloning,做DNA序列分析 |
以DNA序列分析方式確認兩個alleles均遭破壞。 |
細胞培養至出貨規格 |
CRISPR KO Cell Line (2x106 cell /tube)凍管一管 |
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客戶使用檢測 |
請於一個月內測試細胞,並告知測試結果 |
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Catalog# | Name |
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ER1005 | T7 Endonuclease I |
ER1006 | Cas9 Nuclease |
ER1007 | Cas9 D10A Nickase |