Western Blotting │ 蛋白質定量方法比較 BCA vs Bradford
BCA相較Bradford進行蛋白質定量，其靈敏度具有很大的差異性，以下就以ACE Biolabs的實驗結果進行說明：
Bradford Assay原理
Bradford的測定法是利用Coomassie blue結合蛋白質的能力，使試劑由紅棕色轉變為藍色，利用ELISA Rader測定595 nm的吸光度，帶入standard curve就可以知道樣品濃度。
BCA Assay原理
BCA測定法是以傳統的Lowry assay為基礎而發展的，利用銅離子與蛋白質在鹼性條件下反應，會由綠色變為紫色，用ELISA Rader測定562 nm的吸光度，帶入standard curve就可以知道樣品濃度。
BCA Assay/Braford Assay比一比
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BCA Assay (A1035) |
Bradford Assay (A1034) |
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洗滌劑/buffer |
不會干擾 |
會被部分種類干擾 |
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適用蛋白質濃度檢測區間 |
5-2000 μg/mL |
1-125 μg/mL |
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時間 |
30 min |
1-5 min |
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吸光值 |
562 nm |
595 nm |
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反應所需的sample量/well |
25 μL |
20 μL |
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Buffer限制 |
兼容大部分buffer |
避免非離子型去污劑 (Ex: Triton、NP-40等)，對精氨酸和賴氨酸等鹼性和芳香族氨基酸高度敏感；對酸性buffer相容性差 |
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試劑保存 |
室溫，24個月 |
4˚C，12個月 |
Standard Curve
由三條standard curve的R2值可以看出，standard curve涵蓋的蛋白濃度範圍若愈大，bradford assay的準確度愈低（R2值愈小），Bradford的檢測區間建議在0-125 μg/mL，由實驗結果可以證實，BCA assay是靈敏度較高、較穩定的蛋白質濃度檢測試劑。
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500 mL |
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500 mL |
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