Ni NTA Beads 6FF
- Catalog Number : PX0002
- Number : PX0002-s
-
Size:
Qty : - Price : Request Inquiry
-
General Information
1.產品介紹
Ni NTA Beads 6FF以高度交聯6%瓊脂糖凝膠為基質，可以耐受較苛刻試劑條件外，其耐壓的基質，也可耐受最高0.3 MPa的壓力，該產品更適合用於工業大規模蛋白純化，可在相對較高流速下，對目的蛋白純化。
|
Table 1. Ni NTA Beads 6FF產品性能 |
|
|
基質 |
高度交聯的6%瓊脂糖微球 |
|
載量 (/mL 基質) |
>40mg 6XHis-tagged protein |
|
粒徑 (μm) |
45-165 |
|
最大壓力 |
0.3 MPa, 3 bar |
|
儲存緩衝液 |
含20%乙醇 1XPBS |
|
儲存溫度 |
4°C - 30°C |
|
|
原因分析 |
解決方案 |
|
柱子反壓過高 |
填料堵塞 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上柱前使用0.22或0.45μm濾膜過濾，或離心去除。 |
|
樣品太黏稠 |
樣品中含有高濃度的核酸，加長破碎時間至粘度降低，或添加DNase I （終濃度5 μg/ml），Mg 2+（終濃度1mM），置於冰上10-15分鐘。 |
|
|
沖提組分中沒有目的蛋白 |
蛋白可能是包涵體，沒有在上清中 |
可以通過電泳檢測裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵體蛋白需要按照包涵體蛋白的純化方式。 |
|
表達量太低 |
優化表達條件。 |
|
|
目的蛋白結合比較弱，在 洗雜步驟被洗下來了 |
提高wash Buffer的pH，或者降低咪唑濃度。 |
|
|
目的蛋白結合過強，不容易沖提下來 |
降低Elution Buffer的pH值，或者增加Elution Buffer中咪唑濃度。 |
|
|
蛋白降解 |
菌體破碎時添加蛋白酶抑制劑。在4°C下進行純化操作。 |
|
|
沖提組分不純（含有多種蛋白） |
洗雜不徹底 |
增加Wash Buffer體積。 |
|
樣品中含有其他的組氨酸標籤蛋白 |
透過調整pH值，或者咪唑濃度來優化洗雜條件。再使用其他的純化手段（如離子交換，疏水等）進一步純化沖提組分。 |
|
|
填料呈現褐色 |
緩衝液中含有DTT等還原劑 |
請參考表2，適當降低還原劑DTT濃度，或改用巰基乙醇。 |
|
上樣過程中蛋白發生沉澱 |
操作溫度太低 |
室溫下進行上樣。 |
|
蛋白發生聚集 |
在樣品和緩衝液中添加穩定劑，如0.1%的Triton X-100或Tween-20。 |
.png)