Plasmid extraction | 質體介紹
質體(Plasmid)是獨立於宿主染色體DNA的環狀DNA片段，它們主要存在於細菌中，也自然存在於古細菌和真核生物中，例如酵母菌或是植物，質體向宿主提供一種或是多種功能，有益於宿主，例如對於抗生素的抗性，降解功能或是些許毒性。
(Addgene)
所有天然的質體均包含複製起點(Origin of Replication)(控制質體宿主範圍及拷貝數Copy Number)，以及有利於存活的基因如抗生素抗性基因(Resistant gene)，實驗室使用的質體通常是人工產生，將外源DNA導入細菌當中產生，人工質體具有複製起點(Ori)、選擇標記物(如螢光基因、抗性基因)及克隆位點(Cloning Site)，科學家利用這些特性，修飾質體自我複製的能力，使質體成為生命科學不可或缺的工具之一。
Table 1 質體包含DNA片段內容
|
質體內容 |
於質體內用途 |
|
Origin of Replication (ORI) |
DNA序列藉著啟動轉錄蛋白，啟動質體的複製 |
|
Antibiotic Resistance Gene |
可藉由抗生素基因篩選具有抗性基因的質體 |
|
Multiple Cloning Site (MCS) |
短片段DNA包含多個限制酶位點，可插入DNA(insert Gene)，於表達質體中，MCS通常位於啟動子下游 |
|
Insert |
目標基因、啟動子或是其它DNA片段被克隆至MCS中進行進一步研究 |
|
Promoter Region |
驅動目標基因的轉錄，表達載體的重要組成成分，確認基因於不同細胞類型中表達以及可獲得重組蛋白的量 |
|
Selectable Marker |
抗生素抗性基因於細菌中進行選擇，許多質體也具有用於其它細胞類型的抗性基因選擇標記 |
|
Primer Binding Site |
短鏈單股DNA序列，用於PCR擴增或測定序起始點，飲物可用於質體的序列驗證 |
Table 2 質體複製起點及拷貝數
|
DNA construct(Plasmids) |
複製起點(Origin of Replication) |
拷貝數(Copy number) |
分類 |
|
|
pUC vectors |
pMB1* |
500–700 |
high copy |
|
|
pBluescript® vectors |
ColE1 |
300–500 |
high copy |
|
|
pGEM® vectors |
pMB1* |
300–400 |
high copy |
|
|
pTZ vectors |
pMB1* |
>1000 |
high copy |
|
|
pBR322 and derivatives |
pMB1* |
15–20 |
low copy |
|
|
pACYC and derivatives |
p15A |
10–12 |
low copy |
|
|
pSC101 and derivatives |
pSC101 |
~5 |
very low copy |
|
Table 3 抗生素使用條件及儲存建議
|
抗生素 |
建議儲存濃度 |
建議使用濃度 |
|
Ampicillin |
100 mg/mL |
100 µg/mL |
|
Carbenicillin |
100 mg/mL |
100 µg/mL |
|
Chloramphenicol |
25 mg/mL(dissolve in EtOH) |
25 µg/mL |
|
Hygromycin B |
200 mg/mL |
200 µg/mL |
|
Kanamycin |
50 mg/mL |
50 µg/mL |
|
Spectinomycin |
50 mg/mL |
50 µg/mL |
|
Tetracycline |
10 mg/mL |
10 µg/mL |
上述三個表格分別為質體內容，以及不同的複製起點，因應不同的拷貝數，準備相同質體數量情況下，需要增加細菌製備，表三是細菌以及細胞使用抗生素使用濃度及儲存建議，ACE Biolabs也提供相關抗生素化學藥品
ACE Biolabs提供產品及服務
ACE Biolabs提供質體萃取及定性及一系列基因克隆(Gene Cloning)實驗代工服務，歡迎與我們聯絡。
參考連結資訊:
https://www.acebiolab.com/TW/Page/56
.png)