Western-blotting | Loading control指南 2019/11/27

Western-blotting | Loading control指南

Western Blot，常用於分析目標蛋白質的實驗方法，其原理利用電泳分離細胞蛋白質，將蛋白質透過電壓使得蛋白質移動到轉印膜上，利用抗體與蛋白質專一性結合的特質，來偵測特定蛋白質的表現情況。除了偵測樣品中是否含有目標蛋白外，在實驗中也需要比較不同條件下，目標蛋白表達量的差異。因此，需要Loading control (1)證明上樣量的一致 (2)確保蛋白質完整轉印至轉印膜上，並作為normalization之依據。

在選擇 Loading control 時，需要注意

(1) loading control分子量需要與目標蛋白分子量有所區隔

ACE Biolabs 提供您從 13-118 kDa，多種分子量抗體供您選擇。

-> 目標蛋白質分子量較大時，推薦使用 vinculin 作為Loading control。

(2) 了解實驗原理目的與樣品組成，選擇適當的 Loading control

例如 :

->不同組織的細胞結構會有差異，因此在比較不同組織時，應避免使用Actin及Tubulin等結構蛋白。

->細胞在生長及和胞外基質作用時，會改變actin生成，因此樣品為骨骼肌細胞時不適合選用 actin 為 Loading control。

-> 在沒有核膜的樣品中，避免選用 Lamin, PNCA, TBP為 Loading control 。

ACE Biolabs Loading controls :