Flow Cytometry | 流式細胞技術的應用
流式細胞儀是現代生物學、生物醫學、腫瘤學、血液學、免疫學、藥理學與臨床研究等領域中,不可或缺的利器。最早的原型機是在1972年由史丹佛大學的幾位教授研製而成,1973年Becton Dickinson與其合作,以FACS商標名推出第一台流式細胞分選儀。
流式細胞儀上樣簡單、快速,可檢驗的方式多元,成為分生實驗中常用的檢驗方法。尤其是目前最流行的"幹細胞"研究,幹細胞研究最重要的就是要知道幹細胞分化後,是不是成為我們需要的細胞種類,這時候,流式細胞儀就是個篩選細胞的最佳利器,不僅可以定性也可以定量,某些機型的流式細胞儀甚至可以收集分選出細胞,提高細胞的純度。
原理簡述
流式細胞儀主要由流體學系統(fluidics)、光學與電子系統(optics and electronics)組成。待測樣本中的細胞經流體系統傳送,依序地通過雷射照射區域,細胞受雷射激發而產生訊號,訊號接收器接收到訊號後會放大訊號,將這些訊號輸入電腦分析處理,電腦再將資料處理後變成圖形顯示在螢幕上。
流式細胞儀產生並分析的信號主要有光散射信號和螢光信號,藉由光訊號的強弱和波長不同,可以得到細胞大小、型態與顆粒化等資訊。螢光訊號可提供不同細胞生物學特性並應用於許多實驗中。
流式細胞技術應用
生物學/生物醫學應用
腫瘤學應用
腫瘤學研究是流式細胞技術在臨床醫學中最早的應用。人體中正常組織要明確變質並確診癌症需要很長的時間,而流式細胞儀可以偵測出癌前細胞"量"的增多,進而發現癌前病變的部位,簡單來說,正常人體細胞有穩定的DNA二倍體量,通常癌變的細胞會不正常增生(已有文獻證實),而流式細胞技術可以精確得檢測出DNA含量變化,是癌前病變的一個有價值指標。
免疫學應用
流式細胞技術通過螢光抗原抗體檢測技術分析細胞表面抗原,進行細胞分類和亞群分析,此一技術對於人體細胞免疫功能的評估具有重要貢獻。例如:正常人類淋巴細胞T4:T8=2:1,但在人體免疫低下時可能出現倒置,變成1:2,T4與T8的比值也可用來監測腎移植後病人的排斥反應,此技術也可用於愛滋病的診斷和治療中。流式細胞技術也可以在血液中篩選白細胞、顆粒細胞與淋巴細胞。
血液學應用
流式細胞技術在血液學中,主要用於白血病的診斷和治療,利用細胞表面抗原的單株抗體並結合螢光,量測細胞的各式參數以正確判斷該細胞屬性。細胞表面抗原的專一性對於白血病診斷有決定性的作用,例如:造血幹細胞表現CD34;B細胞表現CD10、CD19、CD20等與T細胞表現CD2、CD5、CD7等。
異體造血幹細胞移植也需仰賴流式細胞技術,其中所需的幹細胞鑑別,活性測定,幹細胞採集、分離與純化等,流式細胞技術都是不可或缺的。
藥理學應用
多重耐藥性(Multidrug Resistance, MDR)是指對幾種自然產生的細胞毒素交叉抗性,是化療的主要障礙之一。MDR可能因為跨膜P-醣蛋白的高表達和細胞內藥物重新分配異常,而使細胞內藥物在有效部位的射入量減少。在結構方面可以檢測P-gp的高表達,在功能方面可檢測抗腫瘤藥物的細胞內積聚程度,從而判斷藥物是否有作用在正確的地方。
利用BrdU染色DNA,可以準確測定DNA合成速率,依據DNA直方圖的變化來判斷化療藥物的作用機制或療效。