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內毒素介紹

內毒素(Endotoxin)為組成革蘭氏陰性菌外膜脂多醣(lipopolysaccharide; LPS)複合體的一部分。當細菌死亡或用人工方法破壞後,細菌外膜裂解,釋出脂多醣片段,在宿主內啟動內毒素的致毒機制。內毒素並非蛋白質,因此十分耐熱而且穩定,在100℃的高溫下加熱1小時也不會被破壞,只有在160℃的溫度下加熱2到4個小時,或使用強鹼、強酸或強氧化劑加溫煮沸30分鍾才能破壞它的生物活性。

細菌內毒素廣泛存在於自然界中,如自來水中含內毒素的量為1至100 EU/ml。當內毒素通過消化道進入人體時並不產生危害,但內毒素通過注射等方式進入血液時則可能引起熱原反應、微迴圈障礙、內毒素休克或播散性血管內凝血等。因此,生物製品類、注射用藥劑、化學藥品類、放射性藥物、抗生素類、疫苗類、透析液等製劑以及醫療器材類(如一次性注射器,植入性生物材料)必須經過細菌內毒素檢測試驗合格後才能使用。

內毒素檢測方式

1956年美國人Bang發現美洲鱟血液遇革蘭氏陰性菌時會產生凝膠。其後Levin和Bang確認微量革蘭氏陰性菌內毒素即可引起凝膠反應,從而創立了鱟試劑檢測法。LAL (Limulus Amebocyte Lysate)試劑又稱為鱟試劑,是由鱟的藍色血液中提取多功能血細胞(變形細胞)的溶解物,利用其與內毒素反應會產生凝集的特性而發展出來偵測內毒素的試劑,專用於細菌內毒素檢測(Bacterial Endotoxin Test)。1980年版美國藥典。隨後英、德、意、日以及中國相繼在藥典中收載了這一檢查法。此後鱟試驗逐漸替代家兔熱原試驗。

由於鱟試劑靈敏度高且操作簡便,因此成已廣泛使用於藥物、生物製品及醫療器材等之檢測。目前利用鱟試劑所發展出來的偵測方法有凝膠法 (Gel-Clot LAL)、動力濁度法 (Kinetic Turbidimetric LAL) 以及動力呈色法 (Kinetic Chromogenic LAL)

1) 凝膠法 (Gel-Clot LAL)

凝膠法是利用鱟試劑與內毒素反應會產生凝膠,利用凝膠的生成與否來偵測內毒素的方法,為最早發展出來的簡易內毒素檢測方法,無需任何偵測儀器,以肉眼直接觀察凝膠形成狀態來判別。

性能特點:

1.此法操作簡單、經濟,不需要專用測定儀器。
2.抗干擾能力強,澄清度高,凝膠堅實,靈敏度範圍廣。

2) 動力濁度法 (Kinetic Turbidimetric LAL)

鱟試劑與內毒素反應會產生混濁,動力濁度法是在試劑反應後以分光儀連續偵測其混濁的程度,再利用內毒素含量與形成混濁的速度成正比的特性來定量內毒素含量。動力濁度法可偵測靈敏度範圍為 0.005 to 10.0 EU/ml. 此法可利用多管操作盤或96孔微孔盤操作,由於此試劑亦可做凝膠法,所以減少了兩者方法轉換的問題。

性能特點:

1. 檢測範圍寬,可達4個數量級 (0.005 to 10.0 EU/ml)。
2. 靈敏度高達0.005 EU/ml。
3. 操作簡便,系統自動檢測分析,一步即成。
4. 經濟實用,試劑樣品需要量少,可降至50 μL。
5. 利用多管操作盤或96孔微孔盤操作,可同時檢96個樣品。搭配多道移液器,一次移液可加樣8 - 12孔,加速檢驗流程。
6. 準確定量,適用於醫藥用品生產流程之內毒素含量的動態監控。

3) 動力呈色法 (Kinetic Chromogenic LAL)

呈色法和濁度法相似,但在試劑內加入呈色劑,以顏色深淺的變化來測量不同濃度的標準品及樣品在反應後的 OD. 值,來定量樣品中的內毒素含量。具更高的偵測靈敏度 (0.001 EU/ml)。

性能特點:

1. 檢測範圍寬,可達5個數量級。
2. 靈敏度高,可達0.005 EU/ml。
3. 抗干擾能力強,兼有動態濁度法鱟試劑和終點法顯色基質鱟試劑的優點,不需要凝固蛋白原形成凝膠,根據顯色反應來準確定量樣品內毒素含量。
4. 操作便捷,利用多管操作盤或96孔微孔盤操作,可同時檢96個樣品。搭配多道移液器,一次移液可加樣8 - 12孔,加速檢驗流程。

我們的服務

內毒素檢測不僅是關鍵項目,同時也是實施品質管控不可或缺的重要工具。本司檢測遵循美國藥典(USP)第85章及FDA guideline規範,以LAL (Limulus Amebocyte Lysate) 試劑檢測內毒素含量。由於不同的待檢品可能適用不同的檢測方法,我司技術人員具備妥善完整的訓練且完全清楚個別方法的優勢和限制,對執行內毒素檢測之每步驟皆謹慎處理。

推薦檢測用戶

藥品及醫療器械生產企業大批量內毒素檢測、生產流程內毒素水準動態監測、注射用水,純化水,透析用水等內毒素檢測、生物樣本的內毒素檢測,如疫苗、抗體、蛋白質、核酸、臨床樣本等的內毒素分析。

 

內毒素檢測委託書

ACE-試驗計畫書-內毒素檢測

 

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